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了解绿色荧光蛋白(GFP)及其可修饰标记系列

八卦谈 佚名 2022-11-13 20:22:31

绿色荧光蛋白(GFP)是一个蛋白质的238组成的氨基酸残基(26.9 kDa的呈现亮绿色)荧光时,在蓝色曝光以紫外线范围内。尽管许多其它海洋生物有相似的绿色荧光蛋白,GFP传统上指的是第一个从分离出的蛋白水母 Aequorea victoria的。从GFP A. 维多利亚有一个主要的激发峰在波长 395纳米和在475纳米的小问题。其发射峰在509纳米,这是在较低的绿色部分可见光谱。荧光量子产率的GFP(QY)为0.79。从该GFP 海三色堇(海肾肾形)具有498纳米的单一主要激发峰。


在细胞和分子生物学中,绿色荧光蛋白基因经常被用作一个表达的报道。在修饰的形式已经用于制造生物传感器,以及许多动物已创建了表达GFP作为验证的概念,即一个基因可以在整个给定的生物体中表达。GFP基因可被引入生物体,并保持在通过育种,注射他们的基因组中与病毒载体,或细胞转化。迄今为止,GFP基因已被引入,并在许多人表示细菌,酵母菌等菌类,鱼类(如斑马鱼),植物,飞禽,和哺乳动物细胞.

绿色荧光蛋白

在20世纪60年代和70年代,GFP,与单独的发光蛋白质一起水母发光蛋白(一种酶催化的破裂荧光素,释放光),首次从纯化水母,并研究了其属性下村修。在A. 维多利亚,当发生GFP荧光水母发光蛋白与之交互的Ca 2+离子,诱导青色光晕。一些这方面的发光能量被转移到GFP,逐步转向绿色整体色彩。然而,它作为分子生物学家的工具程序才开始实现,直至1992年道格拉斯·普拉舍报道wtGFP的克隆和核苷酸序列在基因。该项目的资金已经用完,所以普拉舍送基因样本几个实验室。的实验室马丁·查尔菲表示wtGFP的编码序列,具有前几个氨基酸缺失,在异源细胞中大肠杆菌 大肠杆菌和C. 线虫,出版在结果科学 1994 弗雷德里克辻实验室独立地报道了重组蛋白质一个月后的表达。值得注意的是,该绿色荧光蛋白分子折叠并在室温下荧光,而不需要外源辅因子具体到水母。虽然此近wtGFP是荧光灯,它有几个缺点,包括双峰激发光谱,pH值的敏感性,氯化物灵敏度,差荧光量子产率,耐光性差折叠37℃。

一个GFP的首次报道晶体结构是,S65T突变体通过在雷明顿组的科技于1996年一个月后,菲利普斯基独立报道野生型GFP的结构自然生物技术。这些晶体结构提供了重要的背景色形成和周边残留的相互作用。研究人员已经修改了这些残留和随机突变产生在使用各种各样的GFP衍生今天马丁·查尔菲,下村修和钱永健分享了2008年诺贝尔化学奖为他们的绿色荧光蛋白的发现和开发。


优点

GFP的最大优点是,它是遗传的,因为它能够与使用编码DNA的GFP进行变换。此外,可视化GFP是无创性; 它可以通过简单地闪着光检测。此外,绿色荧光蛋白是相对小的和惰性的分子,即似乎不使用任何感兴趣的生物过程干涉。此外,如果用单体使用的是能够在整个细胞容易扩散

生物技术中的应用研究

1.分子标记

2.药物筛选

3.融合抗体

4.生物传感器

5肿瘤发病机制的应用

6.在信号转导中的应用

7.光伏发电



其他蛋白荧光标记的产品目录:

Avidin and streptavidin 亲和素和链酶亲和素产品:

Neutravidin-thiol(SH)  中性亲和素巯基修饰

Streptavidin (without modification)   链霉亲和素

Streptavidin-CY5.5  CY5.5标记链霉亲和素

Streptavidin-CY5    CY5标记链霉亲和素

Streptavidin-CY3    CY3标记链霉亲和素

Streptavidin-TRITC  四甲基异硫氰酸罗丹明标记链霉亲和素

Streptavidin-FITC   异硫氰酸荧光素标记链酶亲和素

Streptavidin-thiol (SH)  链酶亲和素修饰巯基

Avidin-CY3   CY3标记亲和素

Avidin-CY5   CY5标记亲和素

Avidin-CY5.5  CY5.5标记亲和素

Avidin (without modification)   亲和素

Avidin-Sepharose  琼脂糖交联亲和素

Avidin-thiol   巯基修饰亲和素

Avidin-FITC   异硫氰酸荧光素标记亲和素

Avidin-TRITC  四甲基异硫氰酸罗丹明标记亲和素

Serum albumins (BSA,HSA)牛血清白蛋白和人血清白蛋白产品:

Human serum albumin, Sepharose beads  HAS-Sepharose beads  琼脂糖珠偶联人血清白蛋白

Human serum albumin thiol       HSA-SH  巯基修饰人血清白蛋白

Human serum albumin Biotin        HSA-Biotin  生物素修饰人血清白蛋白

Human serum albumin TRITC       HSA-TRITC 四甲基异硫氰酸罗丹明标记人血清白蛋白

Human serum albumin Fluorescein    HSA-FITC 

Human serum albumin CY5          HSA-CY5

Human serum albumin CY3          HSA-CY3

Human serum albumin CY5.5        HSA-CY5.5

Human serum albumin (HSA, without modification)


Bovine serum albumin, Sepharose beads  BSA-Sepharose beads  琼脂糖珠偶联牛血清白蛋白

Bovine serum albumin thiol               BSA-SH

Bovine serum albumin Biotin              BSA-Biotin

Bovine serum albumin TRITC             BSA-TRITC

Bovine serum albumin Fluorescein          BSA-FITC

Bovine serum albumin CY5               BSA-CY5

Bovine serum albumin CY3               BSA-CY3

Bovine serum albumin CY5.5             BSA-CY5.5

Bovine serum albumin (BSA, without modification)

Bovine serum albumin tetramethylrhodamine (BSA-tetramethylrhodamine)

Concanavalin A刀豆求蛋白A产品:

Concanavalin A-CY5   CY5标记刀豆球蛋白A

Concanavalin A-CY3

Concanavalin A-CY5.5

Concanavalin A-Sepharose

Concanavalin A-Biotin

Concanavalin A-SH

Concanavalin A-tetramethylrhodamine  四甲基异硫氰酸罗丹明标记刀豆球蛋白A

Concanavalin A-FITC

Concanavalin A (without modification)

Green fluorescent protein产品:

Green fluorescent protein (GFP) is a 27 kDa protein derived from Aequorea Victoria

Green fluorescent protein-agarose bead

Green fluorescent protein-Biotin

Green fluorescent protein-thiol

Green fluorescent protein (without modification)


小编YQ2021.1


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